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产品概述
product description
内质网存在于除哺乳动物成熟的红细胞外的各种真核细胞中。内质网为由生物膜构成的互相通连的片层隙状或小管状系统，膜片间的隙状空间称为池，通常与细胞外隙和细胞浆基质之间不直接相通。这种细胞内的膜性管道系统一方面构成细胞内物质运输的通路，另方面为细胞内各种各样的酶反应提供广阔的反应面积。内质网的功能与蛋白质的合成、糖类和脂类的合成、解毒、同化作用有关，并且还具有运输蛋白质的功能。 贝博TM BBproExtraTM植物内质网膜蛋白提取试剂盒用简便快速的方法可以从各种植物样本中提取内质网膜蛋白，提取过程简单方便，最快可在两小时内提取得到高质量的内质网膜蛋白。本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。该试剂盒含有蛋白酶抑制剂混合物和磷酸酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高质量的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品特点
1、 使用方便。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
2、 含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3、 紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4、 蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
使用方法
1、 取200-500mg新鲜植物样本叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。
2、 加入500ul-1ml提取液A后充分混匀。
3、 将悬液置振荡器上37℃或室温振荡1-3小时。
4、 在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
5、 在沉淀中加入500ul提取液B，充分混匀。用Dounce匀浆器充分匀浆。
6、 将匀浆液在800g离心10分钟。取上清。
7、 将上清20000g力离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8、 将上清30000-50000g离心20分钟。
9、 弃上清，在沉淀中加入300-500ul提取液C和2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在4℃条件下振荡30分钟-1小时。
10、 在4℃，10000g条件下离心5分钟，取上清。
11、 在37℃水浴10分钟。
12、 在37℃ 800-1000g离心2分钟。
13、 此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约30-50ul液体。
14、 用30-150μl膜蛋白溶解液溶解下层溶液，即得内质网膜蛋白。
15、 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
2、 加入500ul-1ml提取液A后充分混匀。
3、 将悬液置振荡器上37℃或室温振荡1-3小时。
4、 在2000g条件下离心5-10分钟，弃上清，收集沉淀。
5、 在沉淀中加入500ul提取液B，充分混匀。用Dounce匀浆器充分匀浆。
6、 将匀浆液在800g离心10分钟。取上清。
7、 将上清20000g力离心10分钟。弃沉淀，取上清。
8、 将上清30000-50000g离心20分钟。
9、 弃上清，在沉淀中加入300-500ul提取液C和2ul蛋白酶抑制剂混合物，充分混匀后在4℃条件下振荡30分钟-1小时。
10、 在4℃，10000g条件下离心5分钟，取上清。
11、 在37℃水浴10分钟。
12、 在37℃ 800-1000g离心2分钟。
13、 此时溶液分为两层，小心移除上层，保留下层溶液，大约30-50ul液体。
14、 用30-150μl膜蛋白溶解液溶解下层溶液，即得内质网膜蛋白。
15、 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或调整相应的浓度后直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
膜蛋白丰度比较低，需要足够的植物样品上样量才能提高蛋白浓度。也可能部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
膜蛋白丰度比较低，需要足够的植物样品上样量才能提高蛋白浓度。也可能部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和C的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
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