叶绿体核糖体蛋白提取试剂盒

BB-31432
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  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥700元
  • ¥1200元
数量
产品概述 product description

高等植物中有两类核糖体:一类为原核型的,存在于叶绿体与线粒体中;另一类为真核型的,存在于细胞质中。核糖体是细胞进行蛋白质生物合成的部位,同时又与生物体的若干性状,如抗性突变有关。随着高等植物分子生物学的发展,分离、鉴定并利用这些核糖体显得日益重要。 贝博® BBproExtra® 叶绿体核糖体提取试剂盒用简便快速的方法即可快速提取得到新鲜植物样本叶绿体核糖体蛋白。 本试剂盒适用于提取新鲜植物样本的叶绿体核糖体蛋白,用于冻存样本的提取时由于冻存过程中大部分叶绿体可能会被破坏,叶绿体核糖体蛋白回收率较低。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白,下游应用范围广,提取液裂解能力较温和,需要根据实际样本情况优化裂解时间。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分,不可直接用于2D电泳,如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳,请使用贝博其他货号的试剂盒。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳,用脱盐柱脱盐处理(相关产品BB-38113)。 本试剂盒采用非酶法的快速提取方法,可以快速提取得到叶绿体核糖体蛋白,但是回收率比酶法叶绿体核糖体蛋白提取试剂盒稍低。需要酶法提取试剂盒可以联系贝博选择其他货号的试剂盒(相关产品BB-314322),酶法提取得到的叶绿体核糖体蛋白回收率会有增加,但是耗时较长,对蛋白质有破坏。请根据不同的需要选择试剂盒。 本试剂盒需要使用170000×g的离心力,没有相应离心机的话可以选择贝博低速离心法的试剂盒,低速离心法试剂盒只需要达到16000×g以内的离心力即可提取,一般的常规台式离心机均可以满足使用要求。低速离心法试剂盒提取得到的叶绿体核糖体纯度相对于高速离心法的较低,回收率相当。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒,例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒;含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒;专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 (pH7.4,实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液(1X)) (phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS:约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl)2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。 2.实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
使用方法
1. 提取液准备:每100 μl冷的蛋白提取液D中加入1 μl蛋白酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。【注】: 根据需要处理的样品数量准备蛋白提取液,蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 加过蛋白酶抑制剂的提取液一周内未使用完,再次使用前需要再次加入蛋白酶抑制剂。 以下步骤中使用的蛋白提取液为此步配制好的含蛋白酶抑制剂的提取液。2. 取500 mg-1 g新鲜植物样本叶片,洗净擦干后去除叶梗和粗脉。用手术剪刀尽可能剪碎。3. 加入2 ml 试剂A用组织搅碎机/匀浆机/匀浆器充分匀浆。【注】: 最好将叶片组织在液氮中冷冻后捣碎成细的粉末后再进行匀浆。4. 将匀浆液用100 μm细胞筛过滤。【注】: 没有细胞筛的话,在4℃,稍微静置,让粗纤维,成团组织块等沉降,或者以低于100×g力条件下离心1分钟,收集上部液体,弃组织沉淀。 有些含黏液较多的样品可能难以吸取,可以将1ml吸头尖稍微剪掉一点使用。5. 将滤液在300×g条件下离心5分钟,弃沉淀,收集上清。6. 将上清液在3000×g条件下离心15分钟,弃上清,收集沉淀。7. 在沉淀中加入0.5 ml提取液B,充分混匀。8. 置振荡器振荡20分钟。【注】: 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。9. 在200×g力离心2分钟。弃沉淀,取上清。10. 在1000×g力离心2分钟。弃沉淀,取上清。11. 将上清3000×g力离心15分钟。弃上清,留沉淀。12. 在沉淀中加入500 μl试剂C,充分混匀。13. 在2-8℃振荡15分钟。【注】: 使用振荡器/摇床的较低转速,提取液能轻微晃动即可。 没有振荡条件也可以不振荡,置2-8℃静置,稍微延长提取液的处理时间,中间每隔几分钟用移液器吹打混匀即可。14. 在3000×g力离心5分钟。弃沉淀,取上清。15. 在10000×g力离心10分钟。弃沉淀,取上清。16. 将上清在4℃,170000×g力条件下离心60分钟。弃上清,留沉淀。【注】: 如果条件允许,可将离心时间延长到2-24小时。 液体量较少没有合适转头时,可以将小离心管套入大离心管进行离心;或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。17. 在沉淀中加入50-100 μl叶绿体核糖体蛋白提取液D,充分混匀。18. 即得到核糖体蛋白样品,置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。【注】: 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品:BB-3401。 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉,不要被细菌污染。
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