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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 全血总蛋白提取试剂盒提供适用于从各种动物抗凝/非抗凝全血样品中提取总蛋白。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份，包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用不兼容。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
动物全血
产品特点
1.使用方便，将蛋白提取的时间缩短至30分钟。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
2.振荡器
3.涡旋混匀器
4.移液器
5.冰箱
6.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
本试剂盒提取的是全血总蛋白，含所有高丰度的白蛋白等。电泳前可以蛋白稀释液稀释至约5 μg/μl。
电泳加loading buffer后水煮时，蛋白液有时会变得非常粘稠，可以用65℃保温10分钟代替沸水煮。
对于某些目的蛋白在血清中含量很低的情况，或者目的蛋白与白蛋白分子量相近的情况，可能需要先去除白蛋白。需要根据情况选择。白蛋白等去除试剂盒需要自备。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
蛋白酶抑制剂混合物避免反复冻融。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
本试剂盒提取的是全血总蛋白，含所有高丰度的白蛋白等。电泳前可以蛋白稀释液稀释至约5 μg/μl。
电泳加loading buffer后水煮时，蛋白液有时会变得非常粘稠，可以用65℃保温10分钟代替沸水煮。
对于某些目的蛋白在血清中含量很低的情况，或者目的蛋白与白蛋白分子量相近的情况，可能需要先去除白蛋白。需要根据情况选择。白蛋白等去除试剂盒需要自备。
使用方法
1. 提取液制备：
每500 μl蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取300 μl全血样本，加入300 μl蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡20-40分钟。
3. 在4℃，14000×g条件下离心10分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到全血蛋白。
5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500 μl蛋白提取液中加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2. 取300 μl全血样本，加入300 μl蛋白提取液，充分混匀后，在4℃条件下振荡20-40分钟。
3. 在4℃，14000×g条件下离心10分钟。
4. 将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到全血蛋白。
5. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
2.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
3. 电泳蛋白煮样品后成胶状？
全血蛋白样品浓度极高，需要稀释到合适的浓度再进行下游检测。
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
2.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
3. 电泳蛋白煮样品后成胶状？
全血蛋白样品浓度极高，需要稀释到合适的浓度再进行下游检测。
参考文献
1.Jidong Liu et al.
Genome sequencing analysis of a family with a child displaying severe abdominal distention and recurrent hypoglycemia
Molecular Genetics & Genomic Medicine 2020
Genome sequencing analysis of a family with a child displaying severe abdominal distention and recurrent hypoglycemia
Molecular Genetics & Genomic Medicine 2020
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