乳清蛋白提取试剂盒

BB-31332
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产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 乳清蛋白提取试剂盒适用于从哺乳类动物生鲜奶中提取乳清蛋白，包括牛奶、羊奶、驴奶、骆驼奶等样品。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白，下游应用范围广。 本试剂盒提取的蛋白样本有效去除乳清蛋白的脂肪、乳糖等成分。 本试剂盒提取的蛋白样本含有高浓度的盐成分，不可直接用于2D电泳，如下游实验需要直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用贝博其他货号的试剂盒（相关产品BB-3181）。也可以将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（相关产品BB-38113）。 贝博® BBproExtra® 可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物细胞、组织、植物、真菌、酵母、微生物、藻类、液体、土壤等各种不同样本的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对细胞膜、核、胞质、线粒体、溶酶体、高尔基体、内质网、外泌体等细胞不同部位的蛋白提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对下游实验不同应用的试剂盒，例如用于Western Blotting和双向电泳等不同下游应用的试剂盒；含去垢剂成分和不含去污剂成分的蛋白提取试剂盒；专用于蛋白质谱检测、Pull-down实验的试剂盒等总计300多种蛋白提取试剂盒供选择使用。 贝博® BBproExtra® 可以提供针对动物、植物等不同样本的细胞核、线粒体、溶酶体、叶绿体、外泌体等不同细胞器的提取试剂盒。 贝博® BBproExtra® 可以提供蛋白浓缩、脱盐、沉淀、透析、定量、电泳、纯化、检测等不同蛋白样品处理检测等相关试剂盒。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。 2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
乳清
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机2.振荡器3.匀浆机/匀浆器4.涡旋混匀器5.移液器6.冰箱7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液 （pH7.4，实验室常用的10mM磷酸缓冲盐溶液（1X）） （phosphate buffer saline/Dulbecco’s PBS：约含8mM Na2HPO4、2mM KH2PO4、137mM NaCl和3mM KCl）2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管2.吸头3.一次性手套
使用注意事项
1.预实验很重要。必须要做预实验，在正式实验之前取少量样本优化实验条件，并像正式样本一样认真进行，看实验结果是否可行，实验条件是否适合自己的样本。由于生物样本的多样性，不同样本的实验条件通常差异较大，同种细胞的不同模型下需要的实验条件也可能不同，为了避免浪费正式样本和试剂，一定要提前预实验优化实验条件。 2.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。 3.蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。 4.实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。 5.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。 6.如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。 7.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。 8.下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。 9.离心机转速有相对离心力（RCF，×g）和每分钟转速（RPM，r/min）两种表示方式，有些离心机设置有RPM和×g显示切换，但部分离心机没有自动切换功能。需要用下面的公式进行换算：g=r×1.118×10-5×rpm2 （r 为有效离心半径，即从离心机轴心到离心收集管底部中心位置的长度，单位为厘米) 例如: 转速为3000 rpm，有效离心半径为10 cm，则相对离心力（RCF，×g）为=10×1.118×10-5×30002=1006.2（×g）。
使用方法
1. 取1 ml鲜奶，加入2 µl蛋白酶抑制剂，充分混匀。2. 在4℃，3000×g条件下离心15分钟。3. 小心吸出上层脂肪，得到脱脂奶。4. 加入1 ml试剂A，充分混匀，在4℃静置15分钟。5. 在室温，8000-12000×g条件下离心20分钟。6. 将上清移入另一干净离心管。【注】： 小心收集上清，不要吸到沉淀。7. 在室温，8000-12000×g条件下离心20分钟。8. 将上清加入蛋白离心管中，在室温，3000×g条件下离心10-20分钟，至管中只剩下大约100 µl左右液体。【注】： 每次处理500ul上清。 蛋白离心管可以重复使用，直至乳清蛋白无法离心下来或者过滤膜破损。 蛋白离心管过滤膜有破损时，乳清蛋白样本有可能穿过滤膜，务必将每次的滤过液一直保留到乳清蛋白样品分析测试完成。 加蛋白液或Buffer到蛋白离心管时，可以用蓝枪头；但从脱盐管底吸取脱盐好的目的蛋白时，必须用黄枪头；用枪头伸入蛋白离心管中时，必须防止碰到滤膜，以免戳破滤膜。9. 小心吸取管中剩余液体至另一干净离心管。【注】： 为了回收剩余乳清蛋白，可以将内管倒过来插在另一个干净的微量离心管中。放在离心机中，让打开的盖子朝着转子的中央；用一个类似的离心管进行平衡。以1,000 ×g离心2分钟，使乳清蛋白从蛋白内管转移到收集管中。滤液可以保存在收集管中。 也可不倒置离心，直接用移液器直接吸出内管中的样品。10. 加入100 µl试剂B，充分混匀，即得乳清蛋白样品。
常见问题分析
1.用什么方法定量蛋白？ 建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。  2.提取的蛋白具有活性吗？ 本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。  3.蛋白过滤膜会因为离心时间过长而变干么？不会，因为离心管有死体积，总会有溶液残留在滤管中。死体积大约10-20 μl。  4.可以重复使用蛋白离心管么？ 可以重复使用。如果使用、清洗、保存得当，可以反复使用多次。但是多次重复使用后过滤膜有破损风险，注意使用过程中尽量避免尖锐物品戳到膜。离心力不要过大。

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