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产品概述
product description
贝博BBproExtra”胶原蛋白提取试剂盒（BB-313261）适用于从各种富含胶原蛋白的组织(如猪皮、牛皮、鱼皮、肌腱)中提取胶原蛋白。
本试剂盒适用于各种样本来源，如哺乳动物、禽类、鱼类、无脊椎动物等，适用于各种组织部位，如皮、腱、骨、鳞等。
试剂不破坏胶原蛋白的三螺旋结构，最终获得高活性、高纯度的胶原蛋白
贝博®BBproExtra·可以提供各种蛋白质提取、裂解、酶活测定、细胞器分离、免疫组
织化学、蛋白表达、蛋白标记等蛋白质相关试剂盒产品。
保存温度
2-8℃ 保存
注意事项
1.试剂瓶开盖后各组份按要求条件保存。
2.拆封后请尽快使用完！
2.拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB等
适用样本
动物组织
产品应用
WB等
仪器准备
1.离心机
2.恒温振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.恒温振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.正已烷
2.EDTA
3.NaCl
4.纯水
2.EDTA
3.NaCl
4.纯水
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用方法
材料预处理
1.清洗
将 500 mg 新鲜原料用流动水冲洗 3-5 次，去除表面污物、血迹;冷冻原料需先解冻(4'C缓慢解冻，避免反复冻融导致蛋白变性)，剔除皮下脂肪、肌肉组织等非胶原成分，用刀片切成 1-2（立方厘米）的小块.
2.脱脂
将原料按照固液质量体积比 1:5-10(g:mL)浸泡于 5~10 倍体积正已烷中，4℃振荡 2~6 h，离心去除上层液体。
3.用蒸馏水冲洗3次，去除表面残留的正已烷。
4.脱钙(选做步骤)
用 EDTA 脱钙液(0.5 moI/L EDTA)脱钙，直至原料变软(用镊子可轻松捏碎)。
5.用蒸馏水冲洗 3-5 次。
胶原蛋白提取
1.将预处理的原料用 2m1胶原蛋白提取液 A 在 4°C浸泡 6-12 小时。离心去上清
2.在沉淀中加入5m 提取液 B，用匀浆机/组织捣碎机打成匀浆。
3.将匀浆液在 37°℃恒温摇床/振荡器 100-150 rpm 条件下振荡 24-48 小时。
4.将提取液置于 60-70℃水浴/气浴中孵育 15 分钟。
5.将提取液冷却至室温。在 4°C条件下 10000g离心 30分钟。取上清I.
6.在沉淀中加入 2.5 ml 提取液 C，室温振荡 15 分钟。
7.在 4℃条件下 10000g 离心 20 分钟。取上清Ⅱ。合并上清1和上清 II。
8.取 7.5 ml 提取液 D 加入合并的上清中。充分混匀。9.
9.在 4°C静置 24 小时。
10.在 4℃条件下 10000g 离心 20 分钟。弃上清，沉淀即为胶原蛋白。
1.清洗
将 500 mg 新鲜原料用流动水冲洗 3-5 次，去除表面污物、血迹;冷冻原料需先解冻(4'C缓慢解冻，避免反复冻融导致蛋白变性)，剔除皮下脂肪、肌肉组织等非胶原成分，用刀片切成 1-2（立方厘米）的小块.
2.脱脂
将原料按照固液质量体积比 1:5-10(g:mL)浸泡于 5~10 倍体积正已烷中，4℃振荡 2~6 h，离心去除上层液体。
3.用蒸馏水冲洗3次，去除表面残留的正已烷。
4.脱钙(选做步骤)
用 EDTA 脱钙液(0.5 moI/L EDTA)脱钙，直至原料变软(用镊子可轻松捏碎)。
5.用蒸馏水冲洗 3-5 次。
胶原蛋白提取
1.将预处理的原料用 2m1胶原蛋白提取液 A 在 4°C浸泡 6-12 小时。离心去上清
2.在沉淀中加入5m 提取液 B，用匀浆机/组织捣碎机打成匀浆。
3.将匀浆液在 37°℃恒温摇床/振荡器 100-150 rpm 条件下振荡 24-48 小时。
4.将提取液置于 60-70℃水浴/气浴中孵育 15 分钟。
5.将提取液冷却至室温。在 4°C条件下 10000g离心 30分钟。取上清I.
6.在沉淀中加入 2.5 ml 提取液 C，室温振荡 15 分钟。
7.在 4℃条件下 10000g 离心 20 分钟。取上清Ⅱ。合并上清1和上清 II。
8.取 7.5 ml 提取液 D 加入合并的上清中。充分混匀。9.
9.在 4°C静置 24 小时。
10.在 4℃条件下 10000g 离心 20 分钟。弃上清，沉淀即为胶原蛋白。
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