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产品概述
product description
贝博® BBproExtra® 革兰氏阴性菌蛋白提取试剂盒可以从各种革兰氏阴性菌菌体中提取总蛋白，可用于纯化蛋白的粗品制备及总蛋白制备。提取过程简单方便。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解膜组份。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物，阻止了蛋白酶对蛋白的降解，为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
革兰氏阴性菌
产品特点
1.使用方便：不需昂贵设备。
2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。
2.可以处理各种细菌菌体，包括新鲜菌液和冰冻菌体。
3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
4.采用温和的中性裂解组分，保持蛋白活性。
5.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
6.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
7.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂AEBSF、Aprotinin、Leupeptin、Pepstatin A、Bestatin、E-64，每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
8.本试剂盒中不有EDTA，与金属螯和层析等兼容。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
1. 提取液的准备：
根据所需要提取的样本量，每500ul革兰氏阴性菌蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和5ul蛋白稳定剂，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4℃，10000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50mg-100mg湿重菌体样本加入500ul蛋白提取液，吹打混匀，4℃条件振荡20-30分钟。
5. 在150w-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
6. 在4℃， 12000×g条件下将提取液离心5-10分钟。
7. 将上清移入冷的干净离心管，即得革兰氏阴性菌蛋白样品。
8. 将蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。
根据所需要提取的样本量，每500ul革兰氏阴性菌蛋白提取液中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物和5ul蛋白稳定剂，充分混匀后置冰上备用。
2. 在4℃，10000×g条件下将菌液离心5分钟，弃上清，尽量吸干剩余液体，收集菌体。
3. 用PBS洗菌体2次。若为冷冻菌体直接进行下面操作步骤即可。
4. 按每50mg-100mg湿重菌体样本加入500ul蛋白提取液，吹打混匀，4℃条件振荡20-30分钟。
5. 在150w-300w，10s超声/10s间隔条件下冰浴超声至菌液变清。
6. 在4℃， 12000×g条件下将提取液离心5-10分钟。
7. 将上清移入冷的干净离心管，即得革兰氏阴性菌蛋白样品。
8. 将蛋白样品定量后分装置于-80℃冰箱备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
处理部分组织样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂A中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
3.提取时出现胶状沉淀？
蛋白提取液处理产物中有时会出现少量透明胶状物，属正常现象。该透明胶状物为含有基因组DNA等的复合物。不检测和基因组DNA结合特别紧密的特定蛋白的情况下，可以直接离心取上清进行后续实验即可；如果需要检测和基因组结合特别紧密的蛋白，则可以通过超声处理，300w/10秒间隔10秒，超声3分钟，随后离心取上清用于后续实验。检测一些常见的转录因子，例如NF-kappaB、p53等时，不必进行超声处理。
4.提取的蛋白具有活性吗？
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份，不破坏蛋白的结构，没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏，蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.H Shi, C Wang, Y Zhao, et al.
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
2.M Shen, Z Chen, X Mao, et al.
Two different restriction-modification systems for degrading exogenous DNA in Paenibacillus polymyxa
Biochemical and Biophysical Research Communications 2018 （IF=2.559）
3.Gang Zhou, Qing-shan Shi, et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics 2016 （IF=3.888）
Highly efficient visible light driven photocatalytic inactivation of E. coli with Ag QDs decorated Z-scheme Bi2S3/SnIn4S8 composite
Applied Catalysis B: Environmental 2019 （IF=11.698）
2.M Shen, Z Chen, X Mao, et al.
Two different restriction-modification systems for degrading exogenous DNA in Paenibacillus polymyxa
Biochemical and Biophysical Research Communications 2018 （IF=2.559）
3.Gang Zhou, Qing-shan Shi, et al.
Proteome responses of Citrobacter werkmanii BF-6 planktonic cells and biofilms to calcium chloride
Journal of Proteomics 2016 （IF=3.888）
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