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产品概述
product description
贝博BBproExtra®酵母细胞壁蛋白提取试剂盒适用于从各种酵母样本中高效而温和地抽提细胞壁可溶性总蛋白。提取过程简单方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作。
本试剂盒提取的蛋白可用于WesternBlotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gelshift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
适用样本
酵母
产品特点
1.蛋白得率远高于玻璃珠法。
2.使用方便，从酵母中提取蛋白不需经过研磨、超声破碎等前处理。
3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
4.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
5.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
2.使用方便，从酵母中提取蛋白不需经过研磨、超声破碎等前处理。
3.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
4.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
5.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
6.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含5种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
1.旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
2.实验过程中的所有试剂须预冷：所有器具须放-20℃C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5.本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。
2.实验过程中的所有试剂须预冷：所有器具须放-20℃C冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
3.蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
4.可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
5.本试剂盒中提取液和蛋白酶抑制剂中均不含EDTA，根据需要可自行加入。
使用方法
1．提取液制备：
每500ul酵母蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2.取酵母培养物，在4C，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3.用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4.每100-200ul体积酵母沉淀物中加入250-500ul冷的酵母蛋白提取液A，充分混匀。
5在室温或37°C条件下于振荡30分钟-1小时。
6 将离心管转移至冰浴，静置10min。
7在4°C，10,000×g条件下离心10分钟，弃上清，留沉淀。
8.在沉淀物中加入300-500ú冷的酵母蛋白提取液B，混匀后，在2-8℃C条件下振荡30-45 分钟。
9.在4°C，12000×g条件下离心15分钟。
10.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母细胞壁蛋白。
11.将上述蛋白提取物定量后分装于-80°C冰箱保存备用或直接用于下游实验。
每500ul酵母蛋白提取液B中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物，混匀后置冰上备用。
2.取酵母培养物，在4C，1000×g条件下离心5-10分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集酵母沉淀。
3.用冷PBS洗涤酵母两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4.每100-200ul体积酵母沉淀物中加入250-500ul冷的酵母蛋白提取液A，充分混匀。
5在室温或37°C条件下于振荡30分钟-1小时。
6 将离心管转移至冰浴，静置10min。
7在4°C，10,000×g条件下离心10分钟，弃上清，留沉淀。
8.在沉淀物中加入300-500ú冷的酵母蛋白提取液B，混匀后，在2-8℃C条件下振荡30-45 分钟。
9.在4°C，12000×g条件下离心15分钟。
10.将上清吸入另一预冷的干净离心管，即可得到酵母细胞壁蛋白。
11.将上述蛋白提取物定量后分装于-80°C冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A和B的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
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