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保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
植物种子
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
1. 将适量待提取种子样本剥皮，用PBS或纯水洗涤3次。
2. 将样本置研钵液氮充分研磨。
3. 加入1 ml蛋白提取液A充分混匀，移入离心管。
4. 将离心管置振荡器轻轻振荡30分钟-60分钟。
5. 在4℃，15000×g离心20分钟。
6. 收集上清，弃沉淀。
7. 在900 μl上清液体样本中加入100 μl试剂B，充分混匀。
8. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
9. 在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。
10. 小心移除上层清液丢弃，留沉淀。
11. 将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。
12. 加入200 μl试剂C到离心管中。
13. 在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。弃上清，留沉淀。
14. 将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。
15. 用40 μl - 100 μl试剂D溶解蛋白沉淀，充分混匀。
16. 在4℃，10000×g条件下离心10分钟。
17. 收集上清用于下游实验。
2. 将样本置研钵液氮充分研磨。
3. 加入1 ml蛋白提取液A充分混匀，移入离心管。
4. 将离心管置振荡器轻轻振荡30分钟-60分钟。
5. 在4℃，15000×g离心20分钟。
6. 收集上清，弃沉淀。
7. 在900 μl上清液体样本中加入100 μl试剂B，充分混匀。
8. 冰浴或4℃冰箱静置30分钟以上。
9. 在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。
10. 小心移除上层清液丢弃，留沉淀。
11. 将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。
12. 加入200 μl试剂C到离心管中。
13. 在4℃，15000×g以上条件下离心15分钟。弃上清，留沉淀。
14. 将离心管倒置在吸水纸上干燥离心管。
15. 用40 μl - 100 μl试剂D溶解蛋白沉淀，充分混匀。
16. 在4℃，10000×g条件下离心10分钟。
17. 收集上清用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低？
部分植物种子蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大种子样本的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂E中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
部分植物种子蛋白丰度极低，在条件允许的情况下，需要尽可能加大种子样本的上样量。
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用BCA法。不适合用Bradford法，因为试剂E中含有干扰Bradford法的组份，导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系，则可以用Bradford法定量。
参考文献
1.Xiaokang Li, et al.
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）
2.Na Zhao, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 （IF=5.677）
Effects of the size and oxidation of graphene oxide on crop quality and specific molecular pathways
Carbon 2018 （IF=7.082）
2.Na Zhao, et al.
MutS HOMOLOG1 silencing mediates ORF220 substoichiometric shifting and causes male sterility in Brassica juncea
Journal of Experimental Botany 2016 （IF=5.677）
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