酵母组蛋白提取试剂盒

BB-31173
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产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 酵母组蛋白提取试剂盒适用于从各种昆虫组织样本中提取组蛋白。提取过程简单方便，避免了重复性差的研磨法，超声波法或压榨法对酵母细胞的破坏，避免激烈的机械处理造成的氧化和热度升高对目的蛋白的破坏作用。 提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、组蛋白修饰实验比如乙酰化、甲基化、sumoylation等下游蛋白研究。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完！
有效期
一年
检测方法
WB,IP等
适用样本
酵母
产品特点
1.使用方便，从细胞，组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.含蛋白稳定剂，提取的蛋白稳定。
3.紫外检测蛋白浓度时，背景干扰低。
4.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解，蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含7种独立的蛋白酶抑制剂；每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性，包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项：
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
 蛋白酶抑制剂在2-8℃时是固体状态，从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴，变成液体状态后离心至管底部再开盖。
 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀，不影响使用，溶解后正常使用。
 如果试剂盒不能短时间内用完，蛋白酶抑制剂混合物不可以一次全部加入提取液。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 下游实验如果是进行特定蛋白酶或磷酸酶的酶活性检测，提取液可以不加蛋白酶抑制剂或磷酸酶抑制剂，注意提取过程保持低温操作，缩短离心时间。
使用方法
1. 提取液制备：
每500ul蛋白提取液A中加入2ul蛋白酶抑制剂混合物混匀后置冰上备用。
2. 收集酵母培养物，在4℃，1000×g条件下离心5-10分钟，吸干上清，收集酵母细胞。
3. 用冷PBS洗涤酵母细胞两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每100-200mg湿重酵母细胞（或者100-200ul酵母沉淀体积）中加入250-500ul冷的酵母蛋白提取液E，充分混匀。
5. 在室温或37℃条件下于振荡30分钟-2小时。
6. 在4℃，2000×g条件下离心5-10分钟，弃上清，留沉淀。
7. 在沉淀中加入500ul蛋白提取液A，混匀后，在4℃条件下轻轻振荡20-40分钟。
8. 在4℃，16000×g条件下离心15分钟，弃上清，留沉淀。
9. 沉淀中加入100ul组蛋白提取液B。
10. 用200ul枪头反复吹打混匀或充分涡旋振荡混匀。
11. 置4℃冰箱过夜存放。
12. 在12000×g条件下离心10分钟，收集上清。
13. 在上清中加入10-25ul 试剂C充分混匀。
14. 加入上样缓冲液混匀后煮沸，分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。

常见问题分析
1.蛋白浓度低？
处理部分样本时可能没有裂解完全，导致蛋白浓度低。只要适当延长试剂E和A的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理，没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
2.用什么方法定量蛋白？
建议用Bradford法。不适合用BCA法。

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