细胞膜/胞浆/核膜蛋白分步提取试剂盒

BB-31042
选择规格
  • 50T
  • 100T
价格
  • ¥1000元
  • ¥1700元
数量
产品概述 product description

贝博® BBproExtra® 细胞膜蛋白/胞浆蛋白/核膜蛋白提取试剂盒适用于从各种原代或传代细胞和各种实体组织,如脑、脊髓、神经结或纤维、脂肪、肝脏、消化道、肾脏、心脏、肌肉、血管、结缔组织等动物组织中分步提取细胞膜蛋白/胞浆蛋白/细胞核膜蛋白/核内蛋白。提取过程简单方便,可在1小时内完成。 本试剂盒含有的独特配方能够有效溶解细胞膜组份,包括细胞质膜、核膜和各种细胞器膜。本试剂盒含有的蛋白酶抑制剂混合物,阻止了蛋白酶对蛋白的降解,为提取高纯度的蛋白提供了保证。 本试剂盒提取的蛋白可用于Western Blotting、蛋白质电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞实验、酶活性测定等下游蛋白研究实验。 本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。 本试剂盒中不含有EDTA,与金属螯和层析等下游应用兼容。

保存温度
2-8℃
注意事项
1.蛋白酶抑制剂未开盖使用前也可以2-8℃储存。开盖使用后-20℃储存。
2.蛋白酶抑制剂在2-8℃低温时是固体状态,从冰箱取出后恢复至室温或37℃短时间水浴,变成液体状态后离心至管底部再开盖。
3.试剂拆封后请尽快使用完!
有效期
一年
检测方法
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
适用样本
动物细胞
产品特点
1.使用方便,从细胞,组织中提取蛋白不需经过研磨、反复冻融、超声破碎等前处理。
2.将蛋白提取的时间缩短至1小时。
3.含蛋白稳定剂,提取的蛋白稳定。
4.紫外检测蛋白浓度时,背景干扰低。
5.蛋白酶抑制剂抑制了蛋白的降解,蛋白酶抑制剂配方优化。蛋白酶抑制剂混合物包含6种独立的蛋白酶抑制剂;每一种抑制剂可特异性抑制某一种或几种蛋白酶活性。该混合物优化的组成使其可以抑制几乎所有重要的蛋白酶活性,包括丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、丙氨酰-氨基肽酶等。
产品应用
WB,IP,co-IP,ELISA,EMSA等
仪器准备
1.离心机
2.振荡器
3.匀浆机/匀浆器
4.涡旋混匀器
5.移液器
6.冰箱
7.冰盒
试剂准备
1.PBS缓冲液
2.蛋白定量试剂盒
耗材准备
1.离心管
2.吸头
3.一次性手套
使用注意事项
使用注意事项:
 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心,将盖内壁上的液体甩至管底,避免开盖时液体洒落。
 实验过程中的所有试剂须预冷;所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
 蛋白酶抑制剂储存期间溶液如果出现沉淀,不影响使用,溶解后正常使用。
 可以根据自己实验需要加入其它蛋白酶抑制剂单品。
 提取液B在使用前须一直置于2-8℃条件,否则下游膜蛋白提取时会导致不容易分层。
 膜蛋白电泳时loading buffer应该避免煮沸。
 膜蛋白电泳时可以提高loading buffer的SDS含量。

使用方法
1. 提取液制备:
每400 μl冷的蛋白提取液A/B/D中都分别加入2 μl蛋白酶抑制剂混合物和2 μl磷酸酶抑制剂混合物,混匀后置冰上备用。
2. 取5-10×106个细胞,在4℃,800×g条件下离心5-10分钟,小心吸取培养基,尽可能吸干。
3. 用冷PBS洗涤细胞两次,每次洗涤后尽可能吸干上清。
4. 每5×106个细胞中加入400 μl冷的蛋白提取液A,混匀后,在4℃条件下用试剂盒所配针筒反复吸吹细胞,使细胞完全破裂。
5. 在4℃,1000×g条件下离心5分钟。
6. 将上清(I)吸入另一干净离心管,在沉淀中加入100-200 μl冷的提取液B,高速涡旋振荡15秒,充分混匀。
7. 将混匀的提取液B置4℃低速振荡30-60分钟。
8. 将提取液B在37℃条件下水浴10分钟。
9. 将提取液B在37℃下1000×g -2000×g力离心5分钟,此时溶液分为两层(对着光线看),上层为核内蛋白,下层是核膜蛋白约为20-40 μl。小心移除上层,用1-2倍体积的冰冷的提取液D溶解下层即为细胞核膜蛋白。
10. 在步骤6中所得到的上清(I)中加入5 μl提取液C,充分混匀。
11. 在2-8℃振荡20-30分钟。
12. 在37℃水浴10分钟。
13. 在37℃下 1000×g离心3分钟,此时溶液分为两层,上层是胞浆蛋白部分,下层部分(II)是细胞膜蛋白约为40-50 μl。
14. 将上层小心吸入另一预冷的干净离心管,即可得到胞浆蛋白。
15. 用50-150 μl冰冷的提取液D溶解步骤13中的下层部分(II),即得细胞膜蛋白。
16. 将上述蛋白提取物定量后分装于-80℃冰箱保存备用或直接用于下游实验。
常见问题分析
1.蛋白浓度低?
处理部分样本时可能没有裂解完全,导致核蛋白/膜蛋白浓度低。只要适当延长试剂BC的处理时间即可。最好在持续振荡的条件下处理,没有振荡器也可间隔几分钟用吸头吹打混匀。
膜蛋白丰度较低,在条件允许的情况下,需要尽可能加大细胞的上样量。

2.用什么方法定量蛋白?
建议用BCA法。不适合用Bradford法,因为试剂中含有干扰Bradford法的组份,导致定量不准。如果已经进行过透析处理或者用脱盐柱改换过缓冲体系,则可以用Bradford法定量。

3.提取的蛋白具有活性吗?
本试剂盒不含有离子型去垢剂组份,不破坏蛋白的结构,没有对蛋白质之间原有的相互作用的破坏,蛋白均保持其天然构象和活性。
参考文献
1.Manying Wang, et al.
20(S)-ginsenoside Rg3 promotes myoblast differentiation and protects against myotube atrophy via regulation of the Akt/mTOR/FoxO3 pathway
Biochemical Pharmacology 2020

2.GuoDe Wu, et al.
microRNA-592 blockade inhibits oxidative stress injury in Alzheimer's disease astrocytes via the KIAA0319-mediated Keap1/Nrf2/ARE signaling pathway
Experimental Neurology 2020

3.YuyaoXiang, et al.
2,3,5,6-Tetramethylpyrazine improves diet-induced whole-body insulin resistance via suppressing white adipose tissue lipolysis in mice
Biochemical and Biophysical Research Communications 2020

4.Yi Yan, et al.
Transcriptional regulation of microRNA-126a by farnesoid X receptor in vitro and in vivo
Biotechnology Letters 2020

5.Meng Wang, et al.
trans-Cinnamaldehyde Reverses Depressive-Like Behaviors in Chronic Unpredictable Mild Stress Rats by Inhibiting NF-κB/NLRP3 Inflammasome Pathway
Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine 2020

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